在临床前乳腺癌模型中，NT21MP被证明可逆转EMT并克服乳腺癌细胞的耐药性。在另一项涉及乳腺癌和结肠癌的研究中，上述可喜结果借助另一种CXCR4拮抗剂Nef-M1得以重复和证实——Nef-M1是对应HIV-1Nef蛋白第50–60位氨基酸的肽，可与天然配体竞争结合。在这些以人癌细胞和异种移植瘤开展的研究中，Nef-M1肽诱导细胞凋亡，并抑制肿瘤血管生成、生长和转移。

单字母 H2N-NAACAWLEAQ-OH
多字母 H2N-Asn-Ala-Ala-Cys-Ala-Trp-Leu-Glu-Ala-Gln-OH
氨基酸个数 10
分子式 C46H69N13O15S1
平均分子量(MW) 1076.18

Nef-M1肽能有效竞争CXC趋化因子受体4（CXCR4）的天然配体——基质细胞源性因子1-α，从而诱导结直肠癌（CRC）和乳腺癌（BC）细胞凋亡并抑制其生长。然而，该肽在肿瘤血管生成以及上皮-间质转化（EMT）调控中的作用尚不清楚，而这两者是肿瘤生长和转移的关键环节。本研究旨在评估Nef-M1肽的抗血管生成效应，并探讨其在抑制上述癌症中EMT过程中的作用。

我们以表达CXCR4的结肠癌（HT29）和乳腺癌（MDA-MB231）细胞为模型，在体外及严重联合免疫缺陷小鼠异种移植瘤中进行研究。自肿瘤植入时起，通过腹腔注射给予小鼠Nef-M1肽或其氨基酸序列打乱的对照肽（sNef-M1）。通过免疫组化染色检测内皮标志物，以微血管密度（MVD）评估肿瘤组织切片中的血管生成情况。体外血管生成实验则通过将人脐静脉内皮细胞暴露于肿瘤细胞系的条件培养液中进行分析。使用一种不表达CXCR4的乳腺癌细胞系（MDA-MB 468）来研究Nef-M1肽的作用。通过Western blot和免疫荧光分析，评估了Nef-M1对肿瘤血管生成及上皮-间质转化（EMT）在肿瘤和癌细胞中的影响。

结直肠癌（CRC）和乳腺癌（BC）的转移病灶中CXCR4的表达量高于原发性病灶。研究还发现，接受sNef-M1治疗的小鼠肿瘤具有良好的血管形成，而接受Nef-M1治疗的肿瘤则血管化程度极差。事实上，Nef-M1处理小鼠肿瘤的平均微血管密度（MVD）显著低于sNef-M1处理组。Nef-M1处理后的肿瘤组织形态较差，内皮完整性丧失。尽管来自CRC或BC细胞的条件培养基能够支持人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的管状结构形成，但经Nef-M1处理的CRC或BC细胞所分泌的条件培养基则无法促进管状结构形成。Western blot分析显示，Nef-M1能有效抑制CRC和BC细胞以及肿瘤组织中VEGF-A的表达。这表明，经Nef-M1处理的CRC和BC细胞更倾向于表现出E-钙黏蛋白的特征，其表型更接近上皮样状态。

我们的数据表明，Nef-M1肽可抑制肿瘤血管生成及致癌性的上皮-间质转化过程。利用Nef-M1靶向趋化因子受体CXCR4介导的通路，可能为结直肠癌和乳腺癌提供一种新的治疗策略。

参考文献：doi.org/10.18632/oncotarget.4615