通过在未免疫的M13噬菌体展示文库中进行无偏筛选，使用高表达uPAR的转染细胞系作为淘选“试剂”，鉴定出了uPAR拮抗剂的多个15个氨基酸的前体肽。相应的合成肽能抑制uPA与uPAR的相互作用，其IC50值在0.010-10µM范围内。随后，对相应的先导肽进行了合成和优化，通过连续截短、丙氨酸置换合成、光亲和标记以及利用组合化学进行亲和力成熟。最终得到的9个氨基酸的核心肽被命名为AE105，其序列如下：Asp1-Cha2-Phe3-ser4-arg5-Tyr6-Leu7-Trp8-Ser9，其中Cha为环己基-（L）-丙氨酸，丝氨酸和精氨酸均为D型构型，下划线的残基是与uPAR相互作用的热点-如图所示。由于存在非天然氨基酸，该肽在血清中非常稳定，特别是在其C末端被封闭后，例如通过在赖氨酸支架上合成假对称二聚体-被命名为AE120。这种肽以高亲和力（Kd<1纳摩尔）与尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）结合，对乳腺癌细胞系中尿激酶型纤溶酶原激活剂（uPA）的结合具有竞争性抑制作用，其半抑制浓度（IC50）值为2纳摩尔，并能抑制HEp3细胞向鸡胚尿囊膜的侵入。然而，它具有严格的物种选择性，对小鼠的uPA•uPAR相互作用没有抑制作用，这在某些情况下会成为其在使用移植人源异种移植物的小鼠模型系统进行临床前测试时的一个复杂因素。

名称：AE105

单字母 H2N-D-Cha-FsrYLWS-OH

多字母 H2N-Asp-Cha-Phe-DSer-DArg-Tyr-Leu-Trp-Ser-OH

氨基酸个数 9

分子式 C60H83N13O15

平均分子量(MW) 1226.38

这种肽拮抗剂的多功能性和特异性还体现在其支持的多种不同应用上。在文章的实验室中，例如，文章广泛地将其用于重组人uPAR高质量制剂的亲和纯化。其他研究小组已成功将其用于各种分析检测。其中包括在时间分辨免疫荧光测定中将AE120用作添加剂，从而能够特异性地测量癌症患者血液样本中脱落的uPAR结构域I。在另一种情况下，将此肽的N端与荧光素偶联，标记后的肽在荧光偏振测定中用作uPA•uPAR相互作用的替代报告分子，用于低分子量拮抗剂的高通量筛选。尽管有这些优点，但在非侵入性PET扫描成像和治疗诊断学领域，文章预计未来将充分体验到这种特定uPAR靶向肽的潜力。

对人尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）与这种9肽核心拮抗剂复合物的晶体结构进行研究（图3），清楚地揭示了结合肽N端附近的大量自由构象空间，而C端则受到受体表面更严格的限制。因此，通过其α-氨基将AE105或其N端延长版本共价连接到带有侧链羧酸臂的四氮杂大环螯合剂上是可行的，且不会对亲和力和特异性造成不可接受的损失。到目前为止，该策略已成功用于将DOTA（1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸）与放射性核素64Cu、111In、177Lu和213Bi复合，以及将NODAGA（1-(1-羧基-3-羧基丙7-(羧甲4,7-三氮杂环壬烷）与68Ga复合。重要的是，文章对uPA•uPAR和肽•uPAR相互作用的生物化学、动力学和分子基础的广泛了解，使文章能够实施严格的控制实验，这些实验对于揭示所用示踪剂系统的任何非特异性靶向特性是必需的。

参考文献：doi:10.7150/thno.3791. https://www.thno.org/v03p0467.htm