T1M3（T cell immunoglobulin and mucin domain-containing protein 3）作为一种新型免疫检查点分子，在多种免疫细胞上广泛表达。除T细胞外，其在髓系细胞（巨噬细胞、单核细胞与树突状细胞）中亦发挥重要免疫调节功能。在T细胞中，T1M3通过与其配体半乳糖凝集素-9（Galectin-9）结合，传递抑制信号，诱导效应性Th1细胞调亡，进而削弱机体抗肿瘤免疫应答；而靶向TIM3的拮抗剂能够阻断该负向调控通路，恢复Th1细胞产生干扰素-γ（IFN-γ）等关键细胞因子的能力，重建有效的抗肿瘤免疫。在髓系细胞中，TIM3还参与调控凋亡细胞的吞噬清除过程，从而影响肿瘤微环境中的免疫稳态。

P26肽能够与T1M3蛋白的TYR-56及LEU-63氨基酸残基可形成氢键相互作用，其结合自由能为-6.5 kcal/mol，表明两者之间存在较强结合能力与高亲和力。通过在P26肽的特定位点共价连接DOTA螯合剂，构建DOTA-P26复合物，可在维持P26与T1M3结合活性的基础上实现高效68Ga标记,标记率95.95%，放射化学纯度＞95%.研究结果显示，该探针在制备工艺方面具备良好的重复性与可靠性，高度可靠性，有助于确保成像剂量的准确性与批间一致性。

在体外研究实验中，68Ga-DOTA-P26在T1M3过表达的A549-T1M3细胞中摄取量为0.96 ± 0.04 IA%/10⁵细胞，显著高于TIM3低表达的亲本A549细胞（0.41 ± 0.04 IA%/10⁵细胞），该摄取可被过量未标记P26肽有效竞争性阻断（降至 0.46 ± 0.03 IA%/10⁵细胞），证明其与TIM3的结合具有高度特异性与高亲和力。

在活体microPET/CT成像中，⁶⁸Ga-DOTA-P26在多种肿瘤模型中均都表现出优异的靶向能力与信噪比。在A549-T1M3过表达裸鼠模型中，肿瘤区摄取（1.39 ± 0.022 %ID/g）显著高于A549阴性对照肿瘤（1.01 ± 0.012 %ID/g），且肿瘤/心脏摄取比值（0.77 ± 0.009）在所有测试探针中位列第一，提示其具备最佳的靶组织与本底对比度。为评估其对内源性天然构象TIM3的靶向能力，研究进一步采用免疫正常的C57BL/6J小鼠及MC38同系肿瘤模型。在该模型中，⁶⁸Ga-DOTA-P26是唯一实现肿瘤/心脏摄取比值明确大于1的探针（1.51 ± 0.043），有力证明该示踪剂不仅能识别过表达的人源TIM3，也可高效结合天然构象的内源性鼠源TIM3，凸显其卓越的体内靶向能力及潜在的跨物种应用价值。

综上所述，⁶⁸Ga-DOTA-P26 作为一种集成高效制备、稳定性佳、高特异性与优异活体成像性能于一体的放射性示踪剂，是本研究中实现TIM3表达无创性可视化的最优策略，展现出显著的临床转化潜力。

【文献来源】Novel Peptide-Based 68Ga-Labeled Radiotracer for Preclinical Studies of TIM3 Expression；Mol. Pharmaceutics 2025, 22, 270−283；https://doi.org/10.1021/acs.molpharmaceut.4c00884