近期全球临床试验表明，CLDN18.2是胃癌治疗的理想靶点，且CLDN18.2高表达患者可从靶向治疗中获益。因此，准确全面地检测CLDN18.2的表达情况对于患者筛选及抗CLDN18.2治疗指导具有重要意义。本研究利用噬菌体展示技术从千亿肽库中筛选CLDN18.2特异性肽段。293T CLDN18.1细胞用于排除非特异性结合序列和CLDN18.1结合序列，293T CLDN18.2细胞用于筛选CLDN18.2特异性结合肽段。对噬菌体筛选获得的单克隆克隆进行测序，并根据测序结果合成肽段。

最后，以异硫氰酸荧光素(FITC)偶联肽段评估其结合特异性和亲和力。合成了1,4,7,10-四氮杂环十二烷-1,4,7,10-四乙酸(DOTA)偶联肽用于68Ga放射性标记，并表征了其体外和体内稳定性、分配系数、体内分子成像和生物分布。

总体而言，经过噬菌体展示筛选，选择了54个单克隆克隆。随后，基于细胞ELISA结果，选择CLDN18.2偏好单克隆克隆进行脱氧核糖核酸(DNA)测序，经过序列比较后获得4个7肽序列；其中，在体内和体外进一步验证了一条命名为T37的肽。T37肽特异性识别CLDN18.2但不识别CLDN18.1，并与CLDN18.2阳性细胞膜紧密结合。

名称：T37

单字母 H2N-GWHSIPR-OH

多字母 H2N-Gly-Trp-His-Ser-Ile-Pro-Arg-OH

氨基酸个数 7

分子式 C39H57N13O9

平均分子量(MW) 851.95

68Ga-DOTA-T37探针作为亲水探针表现出良好的体外性能和高稳定性；它具有较高的生物安全性，正电子发射断层扫描/计算机断层扫描（PET/CT）研究表明，它能特异性地靶向小鼠的CLDN18.2蛋白和CLDN18.2阳性肿瘤。68Ga-DOTA-T37证明了CLDN18.2特异性探针在PCT/CT成像中使用的优势和可行性，值得进一步开发和利用。

FITC-T37在细胞水平上表现出CLDN18.2特异性，更重要的是，它特异性识别和结合CLDN18.2阳性细胞系，但不识别和结合CLDN18.1阳性细胞系。

本研究中68Ga-DOTA-T37表现出良好的标记产率、放化纯度和体外稳定性，该探针特异性靶向模型小鼠的CLDN18.2蛋白和CLDN18.2阳性肿瘤组织。该探针高剂量给药未损伤小鼠组织器官，人体有效辐射吸收剂量低，表明该探针安全性高。68Ga-DOTA-T37是一种值得进一步开发利用的CLDN18.2特异性核素分子探针。然而，68Ga-DOTA-T37探针体内稳定性较差，代谢较快，可能由于蛋白酶水解所致。在后续研究中，文章将尝试（1）环化T37肽段，（2）使用D型氨基酸代替L型氨基酸，（3）通过C端酰胺化封闭COOH来延长半衰期；（4）利用Lys构建双分支肽，增加探针的分子量，从而延缓其排泄，提高其生物利用度。

参考文献：doi.org/10.1021/acsptsci.3c00165