ETTAC-2 是一种 LRG1 PROTAC 降解剂。ETTAC-2 促进 LRG1 泛素化和降解 (DC 50  为 8.38 µM)。ETTAC-2 抑制 TGF-β-Smad3 信号通路并减少纤维化相关蛋白的分泌。ETTAC-2 可减缓肾纤维化的进展。

富含亮氨酸的 α -2糖蛋白1（LRG1）是一种分泌型糖蛋白，已被证实其在肾纤维化中显著上调，可能通过增强 TGF - β -Smad3依赖性信号通路而加剧病情。

基于体外实验中观察到的显著纤维化抑制效果，研究人员进一步在 UUO 小鼠模型中评估了 ETTAC -2对肾纤维化的治疗潜力。如图A所示， UUO 后小鼠每日接受50 mg/kg ETTAC -2治疗，持续五天。治疗后通过血液和肾脏组织分析评估 ETTAC -2的抗纤维化效果。血清生化检测显示， ETTAC -2组的BUN和SCR水平显著降低，表明其能有效缓解 UUO 诱导的肾功能损害（图B和C）。离体肾脏检查显示，与假手术组和未梗阻的对侧肾脏相比，梗阻肾脏呈现更苍白的外观。然而， ETTAC -2治疗组小鼠的肾脏外观无显著差异（图D）。肾脏重量与体重比值分析表明， ETTAC -2治疗使梗阻肾脏的重量增加减少了16.6%（图E）。通过H&E染色的组织病理学检查显示， ETTAC -2显著减轻了 UUO 引起的肾小管扩张和肾小管上皮细胞空泡化（图F）。此外，肾脏组织病理损伤评分显示， ETTAC -2治疗使肾脏病理损伤约减少50%（图G）。这些结果共同证明了 ETTAC -2在小鼠UUO诱导的肾纤维化中保护肾脏组织结构和功能的有效性。

除评估 ETTAC -2对 UUO 诱导肾纤维化小鼠肾功能的保护作用外，研究人员进一步评估了其抗纤维化功效。如图A和B所示，Masson三色染色显示，与未治疗组相比， ETTAC -2治疗的 UUO 小鼠肾脏基质沉积减少了64.3%。为定量评估 ETTAC -2在体内对抗肾纤维化的功效，研究人员分析了治疗后纤维化标志蛋白的表达情况。在 UUO 小鼠中， α -SMA、胶原蛋白-1A1和纤连蛋白的mRNA表达水平在未治疗条件下均显著高于假手术组。然而，经 ETTAC -2治疗后，这些水平分别下降了79.4%、74.2%和58%（图C–E）。 IHC 染色分析进一步支持了这些结果。在 UUO 后小鼠肾脏切片中， α -SMA、胶原蛋白-1A1和纤连蛋白的表达区域在未治疗条件下显著增加，经 ETTAC -2治疗后分别减少了64.4%、73.4%和71.9%（图F–K）。蛋白质印迹分析进一步量化了这些变化，显示经 ETTAC -2治疗后 UUO 小鼠中 α -SMA、胶原蛋白-1A1和纤连蛋白的表达分别下降了60.3%、61.6%和53.3%（图L–O）。这些综合结果有力证实了 ETTAC -2在减轻 UUO 诱导的小鼠肾纤维化中的功效。

本研究利用开发的LRG1靶向肽进行LRG1募集，并采用来那度胺作为E3泛素连接酶底物，构建了一种专门用于LRG1降解的先进蛋白水解靶向嵌合体 ETTAC -2。细胞降解实验证实， ETTAC -2通过蛋白酶体依赖性机制有效降解LRG1，在8.38 μM 浓度时达到半最大降解水平。此外，体外和体内抗纤维化实验均表明， ETTAC -2能高效诱导纤维化肾脏中LRG1的降解。该作用通过抑制 TGF - β -Smad3信号通路并减少纤维化相关蛋白的分泌，从而延缓肾纤维化进程。

本研究揭示了LRG1在肾纤维化中的关键作用，并将 ETTAC -2定位为靶向LRG1干预的潜在治疗候选药物。

CAS号：DOI: 10.1016/j.ajps.2024.100941